1. 血清标本收集、处理、保存方法:
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,全血标本室温放置1-2 h或4℃隔夜,然后4℃、3000 rpm/min离心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
2. 血浆标本收集、处理、保存方法:
根据样本要求选择EDTA或肝素钠或枸缘酸钠作为抗凝剂,用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,室温混合20 min左右,然后4℃、3000 rpm/min离心20 min,小心收集上清即为血浆。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
3. 细胞标本收集、处理、保存方法:
(1)细胞培养上清
取细胞培养上清到干净离心管中,4℃、3000 rpm/min离心20 min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
(2)细胞裂解液
收集细胞培养液,4℃、3000 rpm/min离心20 min,弃去上清,用预冷的PBS(0.01M,PH 7.4)洗涤三次。加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通过反复冻融,使细胞充**解。然后4℃、10000 rpm/min离心20 min,除去细胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(较长时间),避免反复冻融。
玻璃珠法:预先将适量的玻璃珠(根据采血量多少而定)清洗后,装入采血容器中,灭菌后备用。采血过程中,边采边摇采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滚动,以机械地除去纤维蛋白,使血液不能凝固。本法虽较麻烦,但对淋巴细胞的活性影响zui小,且可减少血小板的混杂。
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